От сигналов о питательных веществах и энергии к метаболическим потокам, митохондриям, стрессовым программам и контролю качества белков и органелл: 57 понятий семинаров 7–12 и связи между ними — 75 научных связей, проверенных по первоисточникам, и 5 учебных сопоставлений; ещё 8 связей ведут к понятиям раздела I.
Как читать карту
Стрелка означает зависимость, а не обязательно перенос вещества или следующую реакцию. Тип связи всегда назван словами в паспорте связи.
Сплошная линия — научная связь, проверенная по первоисточникам; точечная — вывод зависит от изучаемой системы; пунктир — сопоставление понятий, а не причинная связь (без стрелки — понятия сравниваются, а не влияют одно на другое). Стрелка — влияние в указанном направлении, Т-образный конец — тормозящее влияние.
Буква в паспорте и в списке связей — форма утверждения: Ф — экспериментально установленный факт, В — вывод из выписанных посылок, Г — гипотеза. У каждого метода в паспорте связи есть схема (блок «Методы карты» под картой).
Порядок семинаров — порядок изучения, а не цепь событий в клетке.
Вопросы программы показаны дословно; «сквозной вопрос» семинара — подсказка для карты, а не вопрос коллоквиума.
Режим рецензента. Вердикты и замечания сохраняются только в этом браузере.
научная связь (Ф, В, Г)зависит от системысопоставление, не причинная связьтормозящее влияние
Методы карты: схемы (41)
Что измеряет каждый метод, упомянутый в паспортах связей, и чего он не показывает.
Иммунофлуоресценция и прижизненная локализацияЧто показывает: где находится белок (ядро, цитоплазма, поверхность лизосомы или митохондрии) и совпадает ли его сигнал с меткой органеллы, например mTOR с LAMP1. Чего не показывает: совпадение сигналов в пределах разрешения микроскопа не доказывает связывания белков между собой и не показывает активности киназы; фиксация и избыток меченого белка могут менять распределение.Вмешательство: выключение гена, мутант, ингибитор, возвращение белкаЧто показывает: нужен ли белок для измеряемого ответа: выключение гена, мутант или ингибитор снижают ответ, а возвращение устойчивого к вмешательству белка дикого типа восстанавливает его, что поддерживает специфичность эффекта; вывод усиливают сопоставимые количество и локализация возвращённого белка и независимое второе вмешательство. Чего не показывает: достаточность белка (её проверяют добавлением или принудительной активацией) и прямоту действия: эффект может быть косвенным, через другие звенья; при длительном выключении возможна компенсация.Иммуноблот с фосфоспецифичными антителамиЧто показывает: относительное изменение фосфосигнала, нормированного на весь белок, в среднем по клеткам; обработка λ-фосфатазой проверяет, что антитело связывает именно фосфорилированную форму. Чего не показывает: долю фосфорилированных молекул (стехиометрию) — для неё нужны калибровка или сдвиг подвижности белка (Dephoure 2013); различия между отдельными клетками.Активность фермента при разных концентрациях ингибитора (IC₅₀)Что показывает: активность CPT1 в препарате митохондрий при возрастающих концентрациях малонил-CoA; концентрация, при которой активность снижена вдвое (IC₅₀), характеризует чувствительность фермента: CPT1B (мышцы, сердце) тормозится при намного меньших концентрациях малонил-CoA, чем CPT1A (печень). Чего не показывает: поток β-окисления в клетке — его измеряют отдельно по превращению меченого жирного субстрата; IC₅₀ в препарате зависит от условий измерения (концентрации субстрата, состава мембраны).Синтез новой РНК (PRO-seq, nuclear run-on)Что показывает: идёт ли транскрипция гена в момент измерения (например, генов-мишеней TFEB): метят только растущие цепи РНК, поэтому сигнал отражает синтез, а не накопленное количество РНК. Чего не показывает: зрелую мРНК, её распад и количество белка; какой фактор вызвал изменение транскрипции.Прижизненная съёмка органеллы во времениЧто показывает: последовательность и сроки событий у отдельных органелл живой клетки: появление и исчезновение точек ESCRT-III на лизосоме за минуты после повреждения LLOMe (верхний ряд); вытягивание тубулы из аутолизосомы и отделение протолизосомы при длительном голодании (нижний ряд). Чего не показывает: молекулярную причину события без вмешательств; результат зависит от выбранного меченого белка (его избыток может менять процесс) и от фототоксичности освещения; в кадр попадает лишь часть органелл клетки.Адресный FRET-сенсорЧто показывает: концентрацию вещества (pH, Ca²⁺, cAMP и др.) в выбранном компартменте живой клетки по изменению переноса энергии между двумя флуорофорами при связывании вещества. Чего не показывает: общее количество вещества; сенсор сам связывает часть вещества, сигнал зависит от pH и требует калибровки.Сенсоры, адресованные в компартментЧто показывает: свободную концентрацию вещества или отношение (NADH/NAD⁺) в выбранном отсеке живой клетки во времени. Генетически кодируемый сенсор (NADH/NAD⁺ — SoNar, Peredox; H₂O₂ — HyPer, roGFP2-Orp1; Ca²⁺ — GCaMP, акворин) направляют сигнальной последовательностью в матрикс, цитозоль или к наружной мембране; химический краситель Rhod-2 накапливается в митохондриях. При связывании вещества меняется яркость или отношение сигналов при двух длинах волн; перенос энергии между флуорофорами (FRET) используют лишь часть сенсоров. Чего не показывает: общее количество вещества и скорость его образования; сигнал зависит от pH и требует калибровки; сенсор сам связывает часть вещества.Изотопное мечение (¹³C, ²H)Что показывает: маршрут атомов меченого субстрата по распределению изотопологов (M+n) в продуктах. Из [U-¹³C]-глюкозы образуются пируват и лактат M+3; в первом обороте цикла цитрат M+2 образуется через пируватдегидрогеназу (ацетил-CoA M+2), а цитрат M+3 — через пируваткарбоксилазу (оксалоацетат M+3), поэтому M+3 в оксалоацетате, аспартате и цитрате указывает на анаплероз. ²H-мечение: [1-²H]- или [3-²H]-глюкоза передаёт ²H на NADPH в реакциях G6PD или 6PGD соответственно, и по ²H в продуктах, синтез которых расходует NADPH, оценивают вклад окислительной ветви ПФП. Чего не показывает: доля изотополога не равна величине потока: она зависит от разведения метки немечеными источниками, обратимого обмена и времени мечения; в следующих оборотах цикла появляются и другие изотопологи (M+3, M+4), поэтому вклад пируваткарбоксилазы оценивают по раннему мечению; ²H частично обменивается с водой.ВЭЖХ–МС метаболитовЧто показывает: количество отдельных метаболитов и их изотопологов (M+0, M+1…) в экстракте: высокоэффективная жидкостная хроматография разделяет вещества, масс-спектрометрия (ВЭЖХ–МС) измеряет их по массе после калибровки и учёта внутреннего стандарта; так измеряют, например, ATP, ADP и AMP, SAM и SAH, GSH. Чего не показывает: экстракт клеток не разделяет компартменты; без модели метод не даёт величину потока; за время экстракции быстро обменивающиеся метаболиты (ATP, NADH) могут превращаться.Респирометрия и внеклеточный анализ потоков (OCR, ECAR)Что показывает: скорость потребления O₂ (OCR) и её части: после олигомицина остаётся дыхание на протонную утечку, FCCP даёт максимальное дыхание, ротенон с антимицином A — немитохондриальное; в планшетном варианте одновременно измеряют скорость закисления среды (ECAR) по наклону кривых. Чего не показывает: скорость синтеза ATP напрямую — одинаковый OCR возможен при разной доле протонной утечки; ECAR не равен скорости образования лактата: нужны буферная ёмкость среды и поправка на дыхательный CO₂.Реконструкция из очищенных компонентов (in vitro)Что показывает: достаточно ли заданного набора очищенных белков, липидных пузырьков (липосом) и субстратов для реакции — например, синтеза ATP за счёт градиента H⁺, построения цепи убиквитина на субстрате, его извлечения из мембраны или расщепления протеасомой. Чего не показывает: идёт ли процесс так же в клетке, где другие концентрации, конкуренты и регуляторы; отсутствие реакции может означать нехватку неизвестного компонента.Мембранный потенциал митохондрий (TMRM)Что показывает: катионный краситель TMRM накапливается в митохондриях соразмерно потенциалу внутренней мембраны (Δψm), и видна разнородность отдельных митохондрий; FCCP, полностью снимающий потенциал, задаёт нулевой уровень, а ответ на олигомицин показывает, расходует ли ATP-синтаза градиент (потенциал растёт) или поддерживает его гидролизом ATP (потенциал падает). Чего не показывает: потребление O₂ и синтез ATP (их измеряют респирометрией); сигнал TMRM зависит и от потенциала плазматической мембраны, и от массы митохондрий.Ёмкость удержания Ca²⁺ и набухание митохондрийЧто показывает: к изолированным митохондриям добавляют порции Ca²⁺ (штрихи на оси) и следят за Ca²⁺ в среде флуоресцентным индикатором (например, Calcium Green-5N): каждая порция поглощается, пока не откроется пора перехода проницаемости; тогда накопленный Ca²⁺ выходит в среду, митохондрии набухают (светорассеяние суспензии снижается) и теряют потенциал. Число поглощённых порций — ёмкость удержания Ca²⁺; циклоспорин A, ингибитор циклофилина D, её повышает. Чего не показывает: молекулярный состав поры и её открытие в интактной клетке; ёмкость зависит от фосфата, субстратов и состояния препарата.Выделение H₂O₂ изолированными митохондриями (Amplex Red)Что показывает: скорость выхода H₂O₂ из изолированных митохондрий при разных субстратах: пероксидаза хрена с H₂O₂ окисляет Amplex Red в флуоресцирующий резоруфин, и наклон кривой — скорость. С сукцинатом без ротенона скорость высокая за счёт обратного переноса электронов на комплекс I, с глутаматом и малатом — ниже; ингибиторы отдельных комплексов уточняют участок образования супероксида. Чего не показывает: H₂O₂, разрушенную в матриксе пероксиредоксинами и глутатионпероксидазами; образование АФК в клетке, где другие концентрации субстратов, ADP и O₂.Импорт меченого предшественника с защитой от протеазыЧто показывает: перенос белка в митохондрию по устойчивости к протеиназе K и отщеплению сигнальной последовательности (короткий фрагмент в матриксе); если разобщитель добавлен до импорта, белок остаётся снаружи и расщепляется. Чего не показывает: мембранный потенциал; сам по себе метод не разделяет вклад потенциала и ATP-зависимого мотора.Пэтч-кламп митопластаЧто показывает: ионный ток через каналы внутренней мембраны (в том числе MCU) при заданном потенциале; митопласт — митохондрия без наружной мембраны. Чего не показывает: поведение канала в интактной клетке с его регуляторами и физиологическим сигналом Ca²⁺.Цибриды (перенос мтДНК в ρ⁰-клетки)Что показывает: воспроизводится ли дефект с мтДНК донора на фоне нормального ядра реципиента (ρ⁰-клетки лишены собственной мтДНК). Чего не показывает: по одному исходу переноса не устанавливает единственную причину — результат зависит от ядерного фона, числа копий и состава мтДНК.Секвенирование и количественная ПЦР мтДНКЧто показывает: долю варианта мтДНК (на схеме 3 из 8) и число копий на клетку; число копий дикого типа = число копий × доля дикого типа. Чего не показывает: средняя доля в образце не показывает функцию отдельной клетки и не различает ядерный и митохондриальный вклад.Нативный электрофорез собранных комплексов (BN-PAGE)Что показывает: какие комплексы дыхательной цепи и ATP-синтаза собраны: митохондриальные мембраны растворяют мягким детергентом, краситель кумасси G-250 придаёт комплексам заряд, и они разделяются в геле без денатурации; полосы выявляют окрашиванием белка, по активности в геле или иммуноблотом на субъединицу. При утрате фактора сборки исчезает полоса комплекса и копятся подкомплексы. Чего не показывает: синтез отдельных субъединиц и стадию, на которой остановилась сборка, без дополнительных измерений; сохранность суперкомплексов зависит от детергента.Транскрипционный репортёрЧто показывает: активирует ли транскрипционный фактор регуляторный участок — участок связывания NRF2 (ARE) или HIF (HRE): участок ставят перед минимальным промотором и геном люциферазы и сравнивают свечение при активации или выключении фактора и при мутантном участке (нижняя конструкция, участок перечёркнут). Чего не показывает: работу участка в собственном окружении гена — в хроматине, вместе с другими регуляторными участками; избыток репортёрной плазмиды может связать часть фактора; количество мРНК и белка самого гена-мишени измеряют отдельно.Трансляционный репортёр (5′-область мРНК ATF4)Что показывает: меняет ли условие трансляцию мРНК при неизменной транскрипции: 5′-область мРНК ATF4 с uORF1 и uORF2 ставят перед рамкой люциферазы. Без стресса рибосома (овал) после uORF1 быстро повторно начинает трансляцию со старта uORF2, перекрывающейся с рамкой люциферазы, и свечение слабое; при фосфорилированном eIF2α она начинает позже, минует старт uORF2 и чаще начинает с рамки люциферазы. Сравнивают свечение при одинаковом количестве репортёрной мРНК (его проверяют ОТ-ПЦР). Чего не показывает: трансляцию собственной мРНК ATF4 в её окружении и количество белка ATF4; конструкция работает вне собственного гена, а избыток репортёрной мРНК может связать часть факторов инициации.Полисомное и рибосомное профилированиеЧто показывает: распределение рибосом по мРНК и какие рамки (uORF или основная) транслируются; на схеме — мРНК ATF4 при фосфорилированном eIF2α: рибосомы на uORF1 и на рамке ATF4, перекрывающаяся с ней uORF2 пропущена. Чего не показывает: содержание белка; без контроля количества мРНК не отделяет изменение трансляции от изменения количества мРНК.Включение метки в новый белок (пуромицин или ³⁵S-метионин)Что показывает: общую скорость синтеза белка за короткий импульс метки: ³⁵S-метионин включается в новые цепи (авторадиография), а пуромицин встраивается в растущие цепи и выявляется антителом. При стрессе ЭПР синтез в клетках с PERK снижается, а без PERK остаётся высоким. Чего не показывает: какие именно мРНК транслируются (для этого — профилирование рибосом) и куда поступают новые белки; пуромицин обрывает цепи, поэтому импульс должен быть коротким.ОТ-ПЦР сплайсинга XBP1Что показывает: соотношение продуктов XBP1u и XBP1s, различающихся на 26 нуклеотидов (вырезанный IRE1α интрон); более короткий продукт движется в геле быстрее. Чего не показывает: RIDD и путь JNK; отсутствие полосы XBP1s означает лишь, что её содержание ниже порога обнаружения.Содержание мРНК и время её полужизниЧто показывает: содержание мРНК (ОТ-ПЦР) — итог синтеза и распада; после блока транскрипции (актиномицин D) по скорости снижения мРНК оценивают время её полужизни. Чего не показывает: синтез и распад по отдельности без блока транскрипции; количество белка; ингибиторы транскрипции сами вызывают стресс и меняют распад мРНК.Выявление убиквитинированной формы белкаЧто показывает: присоединён ли к белку убиквитин и (с антителами к определённым связям) какого типа цепи: белок осаждают антителами к нему и выявляют убиквитин на иммуноблоте — «лесенку» форм с большей массой. Немодифицированный белок не несёт убиквитина и на этом иммуноблоте не виден (пунктир — его положение); его выявляют на втором иммуноблоте того же осадка антителами к белку. Возможен и обратный порядок: осаждение убиквитинированных белков и выявление исследуемого белка. Чего не показывает: скорость распада и маршрут: убиквитинированный белок может не разрушаться, а деубиквитиназы снимают метку.Соосаждение (коиммунопреципитация)Что показывает: связан ли белок с партнёром в лизате клеток: антитело к p62 на гранулах осаждает p62 вместе со связанными белками, и KEAP1 выявляют в осадке иммуноблотом. Дорожки: 1 — исходный лизат, 2 — осадок с антителом к p62, 3 — осадок с неспецифическим IgG (контроль). Чего не показывает: прямое ли связывание — партнёр может связываться через третий белок; где в клетке находился комплекс; часть комплексов образуется или распадается после разрушения клеток.Прослеживание распада после остановки синтеза (циклогексимид)Что показывает: убывание белка во времени после остановки трансляции циклогексимидом (ЦГ) и период его полужизни; с ингибиторами протеасомы (MG132) или лизосом — путь распада. Чего не показывает: долю каждого пути; при длительной обработке циклогексимид вызывает стресс и останавливает синтез короткоживущих регуляторов самой системы деградации.Импульсная метка с прослеживанием когорты (pulse-chase)Что показывает: судьбу молекул, синтезированных за короткий импульс метки: убывание в клетках с появлением в среде (секреция) или без него (распад). Чего не показывает: поведение отдельных молекул и место распада без дополнительных проб; показывает усреднённую когорту.Чувствительность N-гликана к Endo H и PNGase FЧто показывает: прошёл ли гликопротеин медиальный отдел аппарата Гольджи: Endo H отщепляет высокоманнозные и часть гибридных гликанов, но не комплексные; PNGase F снимает почти все N-гликаны, и белок движется в геле быстрее. Чего не показывает: различие ЭПР и цис-отдела аппарата Гольджи и выход белка на поверхность клетки.Фракционирование мембран и цитозоляЧто показывает: находится ли белок в мембранной фракции (осадок, дорожка 2) или в растворимой цитозольной (надосадочная жидкость, дорожка 1). Качество разделения проверяют контрольными белками: белок мембраны ЭПР должен быть только во фракции 2, белок цитозоля — только во фракции 1. Чего не показывает: точную органеллу и топологию белка: мембранная фракция объединяет разные мембраны, а белок, прочно связанный с мембраной снаружи, тоже попадает в осадок.Оборот LC3-II (иммуноблот с ингибитором лизосом и без него)Что показывает: сколько LC3-II разрушилось бы за время действия ингибитора лизосомного расщепления — разность между чашками с бафиломицином A1 и без него; на схеме без ингибитора LC3-II в контроле и при голодании одинаков, а оборот при голодании больше. Чего не показывает: чистую скорость потока: ингибитор сам меняет образование аутофагосом, а LC3-II образуется и при CASM на одинарных мембранах.Тандемный репортёр mCherry-GFP-LC3Что показывает: соотношение некислых аутофагосом (жёлтые точки: светятся GFP и mCherry) и кислых аутолизосом (красные точки): в кислой среде GFP гаснет, mCherry сохраняется. Чего не показывает: скорость расщепления: красные точки накапливаются и при усиленной доставке, и при замедленном расщеплении; отношение цветов не пропорционально потоку; при нарушенном закислении слившаяся аутолизосома остаётся жёлтой.Распад долгоживущих меченых белковЧто показывает: скорость освобождения метки из белков, меченных аминокислотой; аутофагическую часть (закрашенная разность кривых) выделяют вычитанием проб с блоком аутофагии. Чего не показывает: какие именно белки и органеллы разрушаются; значительная часть распада неаутофагическая.Структура комплексаЧто показывает: взаимное расположение белков и участков связывания (рентгеноструктурный анализ, криоэлектронная микроскопия; обмен водорода на дейтерий показывает, какие участки меняют доступность) и тем самым возможный механизм — например, как pS65-убиквитин и фосфорилированный домен UBL открывают каталитический центр Parkin. Чего не показывает: как часто комплекс образуется в клетке и активен ли он там; структуру получают с очищенными, иногда укороченными белками или белками других видов.Количественная протеомикаЧто показывает: изменение количества многих белков или участков модификации (убиквитинирования, фосфорилирования) одновременно, в том числе белков выделенной органеллы, при сравнении условий; каждая полоса справа — один белок, вправо — больше во второй пробе, влево — меньше. Чего не показывает: причинную связь и место события в клетке; без вмешательств показывает только корреляцию изменений.pH-чувствительные репортёры митофагии (mt-Keima, mito-QC)Что показывает: доставку митохондриального материала в кислый отсек: у mt-Keima меняется спектр возбуждения (на схеме зелёный — нейтральная среда, красный — кислая; цвета условные), у mito-QC в кислой среде гаснет GFP, а mCherry остаётся (жёлтый → красный). Чего не показывает: какой путь запустил доставку; кислый сигнал дают и неселективная аутофагия, и доставка, не зависящая от ATG5; mt-Keima несовместим с фиксацией.Искусственная привязкаЧто показывает: достаточно ли положения белка для эффекта: индуцируемая димеризация или синтетический линкер переносят белок в выбранное место — например, рецептор NDP52 на наружную мембрану митохондрии без деполяризации, — и проверяют, запускается ли привлечение FIP200 и ULK1 и митофагия. Чего не показывает: происходит ли такое привлечение в норме и в каком количестве; искусственное положение может вызывать эффекты, которых нет без привязки.Быстрый и медленный хелаторы Ca²⁺Что показывает: насколько близко к источнику Ca²⁺ (каналу или месту повреждения мембраны) находится Ca²⁺-зависимый сенсор. В цитозоль вводят мембранопроницаемые эфиры хелаторов (BAPTA-AM, EGTA-AM). BAPTA связывает Ca²⁺ быстро и сужает зону высокой концентрации до десятков нанометров от источника (сплошная дуга), EGTA связывает медленно и действует лишь на расстоянии порядка 100 нм и более (пунктирная дуга). Если ответ подавляет BAPTA, но не EGTA, сенсор находится между границами — близко к источнику. Чего не показывает: какой белок служит сенсором Ca²⁺; в нескольких нанометрах от устья канала не успевает и BAPTA; хелатор снижает и общий цитозольный Ca²⁺.Повреждение лизосомы: LysoTracker и точки галектина-3Что показывает: LysoTracker (красный) накапливается только в кислых отсеках, и повреждённые лизосомы теряют сигнал; галектин-3 (зелёные точки) из цитозоля связывает открывшиеся гликаны внутренней стороны мембраны, то есть отмечает крупное повреждение (число точек на клетку). Чего не показывает: утрата LysoTracker не различает малое и крупное повреждение и любое нарушение закисления; малые повреждения ремонтируются без галектина; спад числа точек не различает ремонт и удаление; близкие лизосомы сливаются в одну точку.
Связи, исключённые после научной проверки (видно только с ?audit)
Предскажи: аминокислоты, энергия и аутофагия
Учебная качественная модель культивируемых клеток в первые часы после смены условий: никаких численных значений; ответ «недостаточно данных» — полноправный вариант. Исходное состояние для сравнения — аминокислоты и инсулин есть, энергетический заряд исходный, вмешательств нет. Модель не учитывает другие входы mTORC1 и длительное голодание, при котором активность mTORC1 частично восстанавливается.
А. ИммунофлуоресценцияЧто показывает: где находится mTOR (точки) относительно лизосом (кольца) и где TFEB — в ядре или в цитоплазме. Чего не показывает: активность киназы.Б. Иммуноблот с фосфоспецифичными антителамиЧто показывает: фосфорилирование S6K1 (T389) или ULK1 (S758) относительно всего белка — признак активности mTORC1 в среднем по клеткам. Чего не показывает: долю фосфорилированных молекул и различия между клетками.В. Оборот LC3-IIЧто показывает: разность LC3-II с ингибитором лизосомного расщепления и без него — оборот LC3-II. Чего не показывает: поток по одному содержанию LC3-II: это пул, а не поток.Г. Тандемный репортёр mCherry-GFP-LC3Что показывает: жёлтые точки — некислые аутофагосомы, красные — кислые аутолизосомы. Чего не показывает: скорость расщепления; при нарушенном закислении слившаяся аутолизосома остаётся жёлтой.
Обратная задача: митохондрия помечена, но не удалена
После деполяризации митохондрий (олигомицин с антимицином A) полноразмерная PINK1 накапливается и выявляется pS65-убиквитин, но белки матрикса и внутренней мембраны (например, COX II) не убывают, а репортёр mt-Keima не переходит в кислый сигнал. Какие объяснения совместимы с этими данными? Отметьте все подходящие.
Д. ИммуноблотЧто показывает: накопление полноразмерной PINK1 и pS65-убиквитина (Ub) после деполяризации; убыль COX II — признак удаления митохондрий. Чего не показывает: где находится помеченная митохондрия — в аутофагосоме или в лизосоме.Е. Репортёр mt-KeimaЧто показывает: дошёл ли митохондриальный материал до кислой лизосомы (зелёный — нейтральная среда, красный — кислая; цвета условные). Чего не показывает: на каком этапе прерван путь, если доставки нет.Ж. ИммунофлуоресценцияЧто показывает: окружены ли митохондрии (прямоугольники) мембраной с LC3 (точки и кольцо). Чего не показывает: кислотность среды вокруг митохондрии.З. РеспирометрияЧто показывает: скорость потребления O₂ и её ответ на олигомицин, FCCP и ингибиторы комплексов. Чего не показывает: удаляются ли митохондрии.
Какой эксперимент различит объяснения «аппарат аутофагии не привлекается к митохондрии» и «митохондрия уже в аутофагосоме, но не попала в кислую лизосому»?
Собери объяснение: нагрузка ЭПР и ATF4
Почему при нагрузке ЭПР трансляция ATF4 усиливается, а затем фосфорилирование eIF2α снижается? Отмечайте звенья объяснения по порядку — первым начальное событие; повторное нажатие снимает звено.